Resumen:
El gen Ste2 codifica el receptor alfa-feromona de levadura que pertenece a la superfamilia de receptores acoplados a proteína G de siete transmembranas. La unión de la feromona induce la activación de la proteína G heterotrimérica que desencadena la detención del crecimiento en la fase G1 y la inducción de los genes necesarios para el apareamiento. Mediante mutagénesis mediada por PCR aleatoria, aislamos el mutante 8L4, que presenta una sustitución de un residuo de asparagina por serina en la posición 388 del receptor del factor alfa. La cepa mutante 8L4 muestra defectos fenotípicos, tales como: reducción de la detención del crecimiento después del tratamiento con feromonas, disminución de la activación del gen Fus1 y deficiencia en la capacidad de apareamiento. El residuo de asparagina se encuentra en la segunda mitad de la cola C-terminal sobresaliente intracelular del receptor, y su reemplazo por serina afecta la interacción con las subunidades G (alfa) y Gbeta. Dado que la expresión del receptor, así como sus parámetros cinéticos, es decir, la afinidad del ligando y el número de receptores, no se ven afectados en la cepa mutante, se propone la asociación de la cola C-terminal del receptor con las subunidades G (alfa) y Gbeta. Para la correcta activación de la proteína G heterotrimérica. Además de su papel descrito en la regulación a la baja y en la formación del complejo de preactivación, los resultados que se muestran aquí indican que la cola C-terminal del receptor desempeña un papel activo en la transmisión del estímulo de la feromona de apareamiento a la proteína G heterotrimérica. proponemos que la asociación de la cola C-terminal del receptor con las subunidades G (alfa) y Gbeta es necesaria para la correcta activación de la proteína G heterotrimérica. Además de su papel descrito en la regulación a la baja y en la formación del complejo de preactivación, los resultados que se muestran aquí indican que la cola C-terminal del receptor desempeña un papel activo en la transmisión del estímulo de la feromona de apareamiento a la proteína G heterotrimérica. proponemos que la asociación de la cola C-terminal del receptor con las subunidades G (alfa) y Gbeta es necesaria para la correcta activación de la proteína G heterotrimérica. Además de su papel descrito en la regulación a la baja y en la formación del complejo de preactivación, los resultados que se muestran aquí indican que la cola C-terminal del receptor desempeña un papel activo en la transmisión del estímulo de la feromona de apareamiento a la proteína G heterotrimérica.
Descripción:
The Ste2 gene encodes the yeast K-pheromone receptor that belongs to the superfamily of seven-transmembrane G protein-coupled receptors. Binding of pheromone induces activation of the heterotrimeric G protein triggering growth arrest in G1 phase and induction of genes required for mating. By random PCR-mediated mutagenesis we isolated mutant 8L4, which presents a substitution of an asparagine residue by serine at position 388 of the K-factor receptor. The 8L4 mutant strain shows phenotypic defects such as: reduction in growth arrest after pheromone treatment, diminished activation of the Fus1 gene, and impaired mating competence. The asparagine residue lies in the second half of the intracellular protruding C-terminal tail of the receptor, and its replacement by serine affects interaction with both the GK and GL subunits. Since expression of the receptor as well as its kinetic parameters, i.e., ligand affinity and receptor number, are unaffected in the mutant strain, we propose that association of the C-terminal tail of the receptor with GK and GL subunits is required for proper activation of the heterotrimeric G protein. Besides its described role in downregulation and in formation of preactivation complex, the results here shown indicate that the C-terminal tail of the receptor plays an active role in transmitting the stimulus of mating pheromone to the heterotrimeric G protein.