Resumen:
Los biocatalizadores presentan ventajas frente a los catalizadores clásicos empleados en los diversos procesos químicos, tal como su especificidad en particular. Las enzimas lipolíticas son biocatalizadores con amplia aplicación en reacciones de hidrólisis y síntesis. Mediante cromatografía en gel se purificó parcialmente el complejo enzimático con actividad de lipasa a partir del latex de la jaca (Artocarpushyllus L.). Se encontró que dicho complejo está formado por proteínas con peso molecular de 63,105,120, 136,176 y209 kDa en condiciones nativas, estimando 10 bandas con pesos moleculares que van de 24 a 106 kDa por electroforesis en SDS-PAGE; la actividad lipolítica fue detectada en placas con agar, por medio de la hidrólisis de los sustratos tributirina y aceite de olivo, utilizando purpura de bromocresol y rodamina B como indicador respectivamente. Se observo una mayor actividad del complejo enzimático al utilizar como sustrato al p-Nitrofenil acetato (p-NFA), con una temperatura optima de 70°C YpH optimo de 8. El complejo lipolítico sigue una cinética típica de Michaelis-Menten. Los valores estimados de Km y Vmax en la hidrólisis del p-NFA, fueron de 1.083 mM y 833.33 U/mg, respectivamente. Se encontró que conservo la actividad lipolítica después de su exposición a solventes como metanol, etanol y hexano. Los resultados obtenidos sugieren que las propiedades catalíticas encontradas en el complejo lipolítico podrían ser útiles como herramienta biotecnológica en diversas aplicaciones.
Descripción:
Biocatalysts have advantages over classical catalysts employed in the various chemical processes, such as their specificity in particular. Lipolytic enzymes are biocatalysts with wide application in hydrolysis and synthesis reactions. By means of gel chromatography, the enzyme complex with lipase activity was partially purified from the latex of the jaca (Artocarpushyllus L.). It was found that said complex is formed by proteins with molecular weight of 63,105,120, 136,176 and 209 kDa in native conditions, estimating 10 bands with molecular weights ranging from 24 to 106 kDa by electrophoresis in SDS-PAGE; the lipolytic activity was detected in plates with agar, by means of the hydrolysis of the substrates tributyrin and olive oil, using purple bromocresol and rhodamine B as indicator respectively. A greater activity of the enzymatic complex was observed when p Nitrophenyl acetate (p-NFA) was used as a substrate, with an optimal temperature of 70 ° C YpH optimum of 8. The lipolytic complex follows a typical Michaelis-Menten kinetic. The estimated values of Km and Vmax in the hydrolysis of p-NFA, were 1,083 mM and 833.33 U / mg, respectively. It was found that I retain the lipolytic activity after exposure to solvents such as methanol, ethanol and hexane. The results obtained suggest that the catalytic properties found in the lipolytic complex could be useful as a biotechnological tool in various applications.
Repositorio Institucional Aramara
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